• Toutes les matières premières sont de la plus grande pureté disponible (en pharmacopée européenne et/ou aux normes USP), le cas échéant.
• Un certificat d’analyse est disponible pour chaque lot sur demande sur notre site Internet avec le numéro de lot correspondant.
• La fiche de données de sécurité de GM501 Collagenase est disponible sur demande, et peut être téléchargée sur notre site Internet.
• GM501 Collagenase est fabriquée et testée selon les spécifications suivantes:

pH (à 37°C)                                7.20-7.70

Osmolalité (mOsm/kg)             270-310

Stérilité                                      stérile – niveau d’assurance de stérilité (SAL) 10-3

Test de survie des spermatozoïdes (%)           ≥ 80 de survie après l’exposition de spermatozoïdes d’une densité sélectionnée au milieu du test

REMARQUE :
La réalisation de tests LAL-endotoxines et MEA n’est pas possible avec ces milieux puisque l’activité de la collagénase inactive les enzymes (LAL) et endommage les embryons de souris (MEA) qui sont respectivement utilisés pour ces essais.

1. Extraire 1,5 ml de collagénase GM501 de la bouteille d’origine et le verser dans un tube à fond rond de 5 ml.
2. Réchauffer la collagénase GM501 à 37°C. La collagénase GM501 est tamponnée avec de l’HEPES. L’incubation dans un incubateur à CO2 abaissera le pH.
3. Pour la digestion d’un tissu testiculaire, ramasser le morceau de tissu choisi à l’aide d’une canule fine. Pour faciliter la manipulation, si nécessaire, mettre la suspension de tissu dans une boîte de Pétri de 60 mm. Laisser le milieu de transport adhésif ou de congélation s’écouler autant que possible et transférer le tissu dans un tube de collagénase.
4. Fermer le tube complètement. Mettre ensuite le tube dans l’incubateur ou idéalement dans une étuve pendant 60 minutes pour la digestion du tissu. Une légère agitation toutes les 20 à 30 minutes facilitera la formation d’une suspension de cellules uniques.
5. Resuspendre le tissu digéré en pipettant soigneusement de haut en bas. Dans des conditions idéales, une suspension de cellules uniques de tissu testiculaire et de spermatozoïdes libres est constituée. Si des morceaux grossiers de tissu sont encore visibles, répéter l’étape 4 pendant encore 20 à 30 minutes.
6. Centrifuger la suspension cellulaire de tissu et la laver avec 1-2 ml de milieu de traitement du sperme tamponné HEPES (par ex. GM501 SpermAir). Jeter le surnageant obtenu. De façon alternative, la suspension cellulaire peut être traitée en utilisant un système de gradient de densité (par ex. GM501 Gradient).
7. Après la dernière centrifugation, resuspendre le culot dans un petit volume de 30 à 80 µl de milieu de traitement du sperme tamponné HEPES. Ajouter quelques microlitres de cette suspension dans une boîte.
8. Vérifier au microscope que des spermatozoïdes viables sont présents.
9. Continuer le traitement de la FIV selon les procédures normales internes.

Précautions et mise en garde:

• La collagénase GM501 ne contient pas d’antibiotiques.
• La sécurité à long terme de l’ICSI utilisant la collagénase sur les enfants conçus par cette procédure est encore en cours d’étude.
• Tout matériel biologique humain doit être considéré comme potentiellement infectieux. Par conséquent, manipuler tous les échantillons comme s’ils pouvaient transmettre le VIH ou l’hépatite.
• Toujours porter des vêtements de protection lors de la manipulation d’échantillons.
• Toujours travailler dans des conditions d‘hygiène rigoureuses (environnement ISO 5, par exemple dans une hotte à flux laminaire) pour éviter les contaminations potentielles.
• À n’utiliser que pour l’usage prévu.
• L’établissement de l’utilisateur de ce dispositif est responsable de la maintenance de la traçabilité du produit et doit respecter les réglementations nationales concernant la traçabilité, s’il y a lieu.

Vérifications avant utilisation :

• Ne pas utiliser le produit si la bouteille, l’opercule du conteneur ou l’emballage est ouvert ou défectueux à la livraison du produit.
• Ne pas utiliser le produit s’il est décoloré, trouble ou présente le moindre signe de contamination microbienne.
• La collagénase GM501 peut avoir l’air trouble si elle est réchauffée à 37°C. Cela peut se produire à l’occasion sans perte d’efficacité et cela n’est pas un signe de contamination microbienne. Cela disparait, si la collagénase GM501 est refroidie à température ambiante.

• La durée de conservation est de 9 mois à partir du moment de la fabrication.
• Conserver entre 2 et 8°C.
• Ne pas congeler avant utilisation.
• Conserver à l‘abri de la lumière (du soleil).
• Le produit peut être utilisé sans problème jusqu’à 7 jours après ouverture, lorsque des conditions stériles sont maintenues et que les produits sont conservés à 2-8°C.
• Stable après transport (5 jours maximum) à température élevée (£ 37°C).
• Le contenu ne peut pas être stérilisé à nouveau après ouverture.
• Ne pas utiliser après la date d’expiration.